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定制羊驼免疫纳米抗体

发布时间:2018-03-20 点击量:2814

在羊驼外周血液中存在一种天然缺失轻链的抗体,该抗体只包含一个重链可变区(VHH)和两个常规的CH2与CH3区,但却不像人工改造的单链抗体片段(scFv)那样容易相互沾粘,甚至聚集成块。更重要的是单独克隆并表达出来的VHH结构具有与原重链抗体相当的结构稳定性以及与抗原的结合活性,是目前已知的可结合目标抗原的极小单位。VHH晶体为2.5nm,长4nm,分子量只有15KDa,此也被称作纳米抗体(Nanobody,Nb)。

VHH可溶性极高,不易聚集,能耐高温、强酸、强碱等致变性条件,适合于原核表达和各种真核表达系统,广泛用于开发治疗性抗体药物、诊断试剂、亲和纯化基质和科学研究等领域。

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传统抗体、重链抗体、VHH

纳米抗体诸多方面均优于传统抗体。基于羊驼重链抗体的VHH单域抗体的特殊结构,兼具了传统抗体与小分子药物的优势,几乎克服了传统抗体的开发周期长,稳定性较低,保存条件苛刻等缺陷,逐渐成为新一代治疗性生物医药与临床诊断试剂中的新兴力量。相比于常规抗体,纳米抗体的优势有:

1.分子量小,可穿透血脑屏障;

2.原核或真核系统中高表达;

3.特异性强,亲和力高;

4.对人的免疫原性弱。

纳米抗体文库构建与固相淘选技术路线如下:

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纳米抗体文库构建与淘选示意图

噬菌体展示技术的优点

噬菌体展示技术(Phage Display)是一种基因表达产物和亲和选择相结合的技术,以改造的噬菌体为载体,把待选基因段定向插入噬菌体外壳蛋白质基因区,使外源多肽表达展示噬菌体表面,进而通过亲和富集法表达多肽或蛋白质的噬菌体。

噬菌体展示技术作为一种新兴的高通量筛选技术,在基因工程抗体的制备、疾病诊断和治疗以及蛋白质间相互作用等研究领域已经广泛应用,如:

1、随机肽库,抗体库、蛋白质突变体库的构建;

2、模拟抗原表位的筛选(Screening)等。

服务技术方案:

1、制备免疫原(客户提供抗原)。

2、免疫羊驼。通过4-5次免疫,使羊驼产生较强的免疫应答。

3、分离淋巴细胞。通过mRNA的分离、反转录,得到羊驼重链抗体基因。

4、构建纳米抗体文库。将羊驼重链抗体基因克隆至噬菌粒载体,转化宿主菌,构建纳米抗体文库。

5、亲和淘选。液相筛选或固相筛选等多种方式,进行亲和筛选,筛选高亲和力纳米抗体。

6、原核表达驼源纳米抗体。采用原核表达系统,制备可溶性纳米抗体。

7、抗体活性分析和特异性鉴定。


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